石蜡切片tunel实验染凋亡细胞-上海郑核
一、实验器材及试剂
1、实验器材
名称 厂家 型号
脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J
包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5
病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016
冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5
组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P
烤箱 上海福玛实验仪器有限公司 DGX-9003B
载玻片 Servicebio
掌上离心机 Servicebio D1008E
脱色摇床 Servicebio TSY-B
涡旋混合器 Servicebio MX-F
移液枪 Dragon KE0003087/KA0056573
显微镜 CIC XSP-C204
组化笔 Gene tech GT1001
2、主要实验试剂
试剂 厂家 货号
二甲苯 国药集团化学试剂有限公司
无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司
PBS缓冲液 Servicebio G0002
蛋白酶K Servicebio G1205
破膜液 Servicebio G1204
3%双氧水 Servicebio G0115
苏木素染液 Servicebio G1004
苏木素分化液 Servicebio G1039
苏木素反蓝液 Servicebio G1040
中性树胶 Servicebio G1403
Tunel试剂盒 Roche
DAB显色剂 Servicebio G2111
二、石蜡切片tunel实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
2、修复：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止液体流走），在圈内滴加蛋白酶K工作液覆盖组织，37度温箱孵育25min。将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3、破膜：切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织，常温下孵育20min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4、加试剂1,2：按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂1 (TdT) 和试剂2(dUTP)按1:9混合，加到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃水浴锅孵育2小时，湿盒内加少量水保持湿度。
5、阻断内源性过氧化物酶：将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片放入3%双氧水溶液，室温避光孵育15 min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
6、加试剂3：切片稍甩干后，每张切片加适量试剂3(converter-POD）覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃温箱孵育30min。将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
7、DAB显色：切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为细胞核呈棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。
8、复染细胞核：苏木素复染3min左右，自来水洗，苏木素分化液分化数秒，自来水冲洗，苏木素返蓝液返蓝，流水冲洗。
9、脱水封片：将切片依次放入70%酒精5min-80%酒精5min -90%酒精5min -95%酒精5min -无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
三．结果判断
苏木素染细胞核为蓝色，DAB显出来的阳性凋亡细胞核为棕黄色
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