上海郑核生物科技有限公司

冰冻切片免疫组化抗原抗体结合检测蛋白-上海郑核

价格:34 2022-02-06 10:24:01 461次浏览

冰冻切片免疫组化抗原抗体结合检测蛋白-上海郑核

一、实验器材及试剂

1、实验器材

名称 厂家 型号

冰冻切片机 Thermo Cryotome E

载玻片 Servicebio

盖玻片 江苏世泰实验器材有限公司 C

微波炉 格兰仕微波炉电器有限公司 P70D20TL-P4

脱色摇床 Servicebio TSY-B

涡旋混合器 Servicebio MX-F

掌上离心机 Servicebio D1008E

移液枪 Dragon KE0003087/KA0056573

组化笔 Gene tech GT1001

冰箱 青岛海尔股份有限公司 BCD-192TGN

显微镜 CIC XSP-C204

2、主要实验试剂

试剂 厂家 货号 稀释比

OCT包埋剂 Sakura 4583

无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司

二甲苯 国药集团化学试剂有限公司

EDTA(PH8.0)抗原修复液 Servicebio G1206

EDTA(PH9.0)抗原修复液 Servicebio G1203

柠檬酸(PH6.0)抗原修复液 Servicebio G1202

PBS缓冲液 Servicebio G0002

4%多聚甲醛 Servicebio G1101

3%双氧水 Servicebio G0115

BSA Servicebio G5001

正常兔血清 Servicebio G1209

苏木素染液 Servicebio G1004

苏木素分化液 Servicebio G1309

苏木素返蓝液 Servicebio G1340

中性树胶 Servicebio G1403

一抗:

二抗:

组化试剂盒DAB显色剂 Servicebio G1211

二、冰冻切片免疫组化实验步骤

1、冰冻切片固定:冰冻切片室温晾干,置于4%多聚甲醛固定10min,于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

2、抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中低火10-15min,断电间隔10min转至中低火10-15min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定)

3、阻断内源性过氧化物酶:切片放入3%双氧水溶液,室温避光孵育25min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

4、血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加用3%BSA或者10%正常兔血清均匀覆盖组织,室温封闭30min。(一抗是山羊来源用10%正常兔血清封闭,一抗其它来源的用3%BSA封闭)

5、加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

6、加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加组化试剂盒内与一抗相应种属的二抗(HRP标记)覆盖组织,室温孵育50min。

7、DAB显色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下控制显色时间,阳性为棕黄色,自来水冲洗切片终止显色。

8、复染细胞核:苏木素复染3min左右,自来水洗,苏木素分化液分化数秒,自来水冲洗,苏木素返蓝液返蓝,流水冲洗。

9、脱水封片:将切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min --无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min 中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。

10、显微镜镜检,图像采集分析。

三、冰冻切片免疫组化实验结果判读

苏木素染细胞核为蓝色,DAB显出的阳性表达为棕黄色。

郑核生物优势货源:麦克林全国授权经销商、TCI、阿拉丁、Abcam、CST、三鹰、索莱宝、SIGMA、alfa、ACROS、WAKO、岸田化学、等试剂;病理实验的专业助手,病理切片,HE染色,免疫组化,特殊染色,病理大切片专业的设备,有资质的人员为大家提供动物组织脱水,包埋,制片,染色等病理科研技术服务!多组织包埋、切片、he染色、全景扫描

病理分析、masson染色、免疫组化、WB

免疫荧光、RT-PCR、透射电镜、ELISA

扫描电镜、生化检测收费标准私信,真是实验结果,公司正规运营资质可验查,为病理实验提供有效保障。;优势产品:Roche、BD、santa、R&D、博士德、博奥森、联科、华美、南京建成、Thremo、Millipore、Axygen、NEST、四季青、gibco、百灵威、ELK、abways、BI、bioword、affinity、bioss、欣博盛、PAN、同仁、康为、汇力、天根等;

店铺已到期,升级请联系 15927350233
联系我们一键拨号18137113131